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(1)动物细胞培养时需用___处理组织块使其分散开以获得单个细胞,动物...
1、进行动物细胞培养时,首先将组织块剪碎,用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境的pH为2~4。
2、从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长,动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。
3、胰蛋白酶有消化作用,胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞。
4、首先将动物组织剪成小块,用胰蛋白酶将组织块消化成单个细胞,然后离心沉淀过滤,去除上清液,得到沉淀的细胞,加入营养液,主要包括血清,葡萄糖,氨基酸,无机盐,维生素。
5、胰蛋白酶的最适PH中性偏碱,如果用胃蛋白酶最适ph酸性很强。
6、动物细胞培养的过程:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境:要对培养液和所有培养用具进行无菌处理,在细胞培养液中添加一定量的抗生素,定期更换培养液以清除代谢废物。营养物质:动物细胞培养时,通常在合成培养基中加入适量动物血清或血浆。
2、无菌、无毒的环境 对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
3、进行动物细胞培养的常用条件是:无菌、无毒的环境;营养;适宜的温度和pH;气体环境。无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。
4、无菌环境 无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内,解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵,但细胞在体外培养的过程中,缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。
5、细胞培养的条件和要求 所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染。目前最可靠和最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。如:玻璃制品、布类、金属制品:8kg20min。
动物细胞固定化培养过程中主要有两种培养方式
1、动物细胞固定化培养过程中主要有两种培养方式如下:微囊化 微囊化培养技术其要点是:在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊,再将微囊放入培养系统内进行培养。
2、另一种培养方式是贴壁培养:也称为细胞贴壁,贴壁后的细胞呈单层生长,所以此法又叫单层细胞培养。大多数哺乳动物细胞的培养必须用这种方法。
3、悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。
4、悬浮培养是大规模细胞培养的理想方式,可用类似于微生物的方法进行悬浮培养。
5、生长特性:贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生长期。一般数天后就铺满培养表面,并形成致密的细胞单层。
6、固定化活细胞的制备方法主要有物理吸附法和包埋法两种。1.物理吸附法 带电的微生物细胞和载体之间的静电相互作用,使细胞体吸附固定在硅藻土、木材、玻璃、陶瓷和塑料等载体上。